如果是做的相对定量，用CTmean的结果就可以了，计算方法就是R＝2-ΔΔCt，现在很多仪器你只要设置的时候明确标出内参基因和目的基因，这个结果也是会有自带软件给计算出来的。
看CT值是分析荧光定量PCR最直观的一个数据，CT值一般在35左右就失去参考价值了，平时我们实验室用BIODAI-PCR荧光定量法测得的扩增曲线的起跳值基本在30左右。
实时荧光定量PCR（ realtime fluorescence quantitative PCR，RTFQ PCR） 是1996 年由美国Applied Biosystems 公司推出的一种新定量试验技术，它是通过荧光染料或荧光标记的特异性的探针，对PCR产物进行标记跟踪，实时在线监控反应过程，结合相应的软件可以对产物进行分析，计算待测样品模板的初始浓度。
如果有标准曲线，按照标准曲线计算。一般都是相对量，则用delta delta CT方法来计算。举例如下：对照组基因A的CT值为20， 内参（比如βactin）CT值15。实验组基因A CT值18，内参CT值14。首先算加样量：delta CT=15-14=1。2的1次方是2。也就是说实验组的加样量是对照组的2倍。
荧光阈值Ct是实时定量PCR反应中的一个指标，是指在PCR反应过程中，荧光信号触发荧光探针发出的信号强度值达到一个特定的阈值会被记录。如果荧光强度值低于阈值，说明实验中该靶序列的数量太少无法检测到。
Sybergreen可以和所有核酸结合，没有特异性。所以要保证特异性的话，最好用其他的方法。扩增体系中加入模板DNA的体积，比如同时10微升的体系，对照组加1微升DNA，实验组加2微升DNA，则实验组的加样量是对照组的2倍。
荧光定量PCR之后计算目的基因的相对表达量一般采用2-△△ct的方法。我们还是假设对照组和处理组各有三个生物学重复（即对照组3个cDNA样品cDNA1， cDNA2， cDNA3，处理组3个cDNA样品cDNA4， cDNA5， cDNA6），三个技术重复（即每个cDNA的每个基因点三个孔）。
相对定量可以分为比较Ct法和其他一些相对方法。比较Ct指的是通过与内参基因Ct值之间的相差来计算基因表达差异，也称之是2-DDCt。1绝对定量从标准曲线获得线性方程：Y=-432X+3638；R2=0.995，E=95%，所以可以进行数据分析。
相对的话你需要一个对照，一般就是指内参。首先选取对照组的内参作为标准的100%表达水平，然后拿实验组的表达量比对照组表达量再乘以实验组内参表达量比对照组内参表达量。
1、荧光实时定量PCR（qPCR）是一种精密的分子生物学技术，它通过在PCR反应体系中嵌入荧光探针或染料，实时监测DNA扩增过程，通过荧光信号的积累，准确评估目标基因的表达水平。qPCR技术的基石分为两种方法：SYBR Green荧光染料法和TaqMan荧光探针法。
2、实时荧光定量PCR（Quantitative Real-time PCR）技术，是指在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，最后通过标准曲线对模板进行定量分析的方法。
3、荧光定量 PCR 常用的方法是 DNA 结合染料 SYBR GreenⅠ的非特异性方法。 SYBR Green I 是一种结合于所有 dsDNA 双螺旋小沟区域的具有绿色激发波长的荧光染料， 可与所有的各种序列的双链 DNA 分子结合。
荧光定量PCR 实验步骤： ①取冻存已裂解的细胞，室温放置5分钟使其完全溶解。②两相分离 每1ml的TRIZOL试剂裂解的样品中加入0.2ml的氯仿，盖紧管盖。手动剧烈振荡管体15秒后，15到30℃孵育2到3分钟。4℃下12000rpm离心15分钟。离心后混合液体将分为下层的红色酚氯仿相，中间层以及无色水相上层。
PCR扩增过程必须保证扩增产物只有特异的目标产物，为此，首先要保证PCR反应体系达到最优。目前许多公司都有用于实时定量PCR反应的试剂盒，可以方便PCR反应的操作。反转录 反转录所得cDNA的量必须精确地等于相应的mRNA的量，反转录对于实时定量PCR来说是非常关键的一步。
检测方法是：探针设计在突变位置，有几个突变点设计几个（不同突变型需要不同的荧光标记：例如，野生型探针用FAM、其中一个突变点探针用VIC或者HEX、另外的一个突变探针用TET等等）；然后在突变点两端设计引物（大概100－150bp就可以了。
1、如果有标准曲线，按照标准曲线计算。一般都是相对量，则用delta delta CT方法来计算。举例如下：对照组基因A的CT值为20， 内参（比如βactin）CT值15。实验组基因A CT值18，内参CT值14。首先算加样量：delta CT=15-14=1。2的1次方是2。也就是说实验组的加样量是对照组的2倍。
2、如果是做的相对定量，用CTmean的结果就可以了，计算方法就是R＝2-ΔΔCt，现在很多仪器你只要设置的时候明确标出内参基因和目的基因，这个结果也是会有自带软件给计算出来的。
3、方法 用Line—Gene FQD-33A型荧光定量PCR检测系统检测本院门诊和病房乙肝病人血清HBV DNA77份，分别用最大二阶导数法和样点拟合法进行结果分析。结果 发现两种分析方法的总体相关性较好（r=0．978）。
4、Sybergreen可以和所有核酸结合，没有特异性。所以要保证特异性的话，最好用其他的方法。扩增体系中加入模板DNA的体积，比如同时10微升的体系，对照组加1微升DNA，实验组加2微升DNA，则实验组的加样量是对照组的2倍。
5、现在最常用的两种分析实时定量pcr 实验数据的方法是绝对定量和相对定量。绝对定量通过标准曲线计算起始模板的拷贝数；相对定量方法则是比较经过处理的样品和未经处理的样品目标转录本之间的表达差异。2－△△ct方法是实时定量pcr 实验中分析基因表达相对变化的一种简便方法，即相对定量的一种简便方法。
6、巧妙地校正背景荧光的干扰，确保分析结果的准确性。这样，每一个实验结果都能被精准地定位在统一的分析域值水平上。总的来说，frax以卓越的技术和智能设计，简化了荧光定量PCR的复杂流程，提供了一种高效且精确的科研工具。它不仅提升了研究效率，还为科学家们揭示生命科学的深层奥秘提供了强大支持。
